弱極性色譜柱的柱效能是評(píng)價(jià)色譜性能的一項(xiàng)重要指標(biāo),混合物能否在色譜柱中得到分離,除取決于選擇合適的固定相外,還與色譜操作條件及色譜柱的裝填狀況等因素有關(guān)。
在一定的色譜操作條件下,色譜柱的柱效可用理論塔板數(shù)或理論塔板高度來(lái)衡量。一般說來(lái)塔板數(shù)愈多,或塔板高度愈小,色譜柱的分離效能愈好。
弱極性色譜柱的柱效值并不足以預(yù)測(cè)在所有條件下的柱性能。對(duì)大多數(shù)色譜工作者來(lái)說,柱性能指的是色譜柱用于特定分離的能力,而僅僅有高柱效并不能保證這種分離能力。不管用什么特定的測(cè)試方法,都會(huì)有幾個(gè)參數(shù)影響柱效的測(cè)定。而測(cè)量和計(jì)算方法對(duì)柱效值的確定起著極大的作用。這些參數(shù)包括:洗脫液的成分和粘度及其線流速,測(cè)定塔板數(shù)所用的溶質(zhì)、溫度、柱長(zhǎng)、填料裝填方式、顆粒度,還有所選用的測(cè)量和計(jì)算方法。
一般柱效不好,先排除其他問題,都沒有問題的話就是柱子不行了。如果柱子比較老,可以反過來(lái)小流速?zèng)_洗一下(僅適用舊柱子,有風(fēng)險(xiǎn))。把柱頭變色的填料挖掉,用同類新的填料填充好,效果很好。正向沖洗色譜柱、反向沖洗色譜柱、超聲清洗色譜柱篩板、如果是柱內(nèi)死體積增加則需更換新柱。
色譜柱是消耗品,理論來(lái)說,柱效很低的色譜柱是基本沒用的,但是有一招,就是反沖色譜柱,但要注意流速不要設(shè)置太大,這樣的話還能再堅(jiān)持一會(huì)。如果柱子真的很老舊了,就反相沖洗試試,可能還能用一段時(shí)間,但不會(huì)太久。在然后就只能換填料了,或換新的柱子。
對(duì)于提高弱極性色譜柱柱效的方法可以參考:
1.降低移動(dòng)相的流速,但會(huì)使分析時(shí)間延長(zhǎng)。
2.減少固定相的量,但色譜柱中樣品的負(fù)載量也隨之減小。
3.減小固定相的顆粒度,但不能過分,過分后色譜柱的滲透率也會(huì)減小。
4.選用低粘度的移動(dòng)相,以利于快速傳質(zhì),但卻不利于多組份分析。
5.適當(dāng)提高柱溫,可降低移動(dòng)相的粘度,但柱效和分離度也隨之降低。
6.盡量減小停滯移動(dòng)相的體積,但卻加快了移動(dòng)相的流速。